二、問題與展望
1．移植部位：通常理想的細(xì)胞移植靶點應(yīng)該選擇在癲癇灶，這樣可以減少細(xì)胞移植對于其他器官造成的不良影響。Chu 研究表明，通過靜脈注射移植神經(jīng)干細(xì)胞，干細(xì)胞不僅存在于海馬的CA1區(qū)、CA3區(qū)和下托，而且存在于梨狀皮質(zhì)(piriform codex)、杏仁核、小腦、丘腦等處，甚至在肺、腎和脾均發(fā)現(xiàn)移植的干細(xì)胞。雖然未發(fā)現(xiàn)由于靜脈注射干細(xì)胞引發(fā)的并發(fā)癥，但靜脈移植干細(xì)胞存在的潛在危險不容忽視。
大量研究表明海馬是顳葉癲癇的癲癇灶，因此在今后的研究中應(yīng)選擇海馬為移植靶點。Shetty 通過向海仁酸癲癇模型鼠的海馬不同亞區(qū)移植胚胎神經(jīng)元，最終證明海馬CA3區(qū)是移植的最佳靶點，移植的細(xì)胞能夠最大限度的抑制苔狀纖維發(fā)芽。林志國 等應(yīng)用海仁酸癲癇鼠模型，將神經(jīng)干細(xì)胞移植到癲癇鼠的患側(cè)海馬CA3區(qū)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)移植的神經(jīng)干細(xì)胞抑制了癲癇鼠的苔狀纖維發(fā)芽，并且移植組大鼠海馬腦電棘波的頻率及幅度均減少。Toshinori等 雖然以海馬為移植靶點，但未說明具體的移植亞區(qū)。
2．移植效果：干細(xì)胞移植的目的是治療癲癇，因此治療效果是衡量干細(xì)胞移植成敗的關(guān)鍵因素。行為學(xué)表現(xiàn)和腦電圖相結(jié)合是判斷癲癇治療效果的金標(biāo)準(zhǔn)。癲癇患者的癲癇發(fā)作大多發(fā)生在睡眠過程中，因此應(yīng)該集中在夜間通過視頻錄像監(jiān)測癲癇動物的癲癇發(fā)作 。B~saki報道¨ 向“去神經(jīng)支配癲癇鼠模型”(切去內(nèi)側(cè)枕葉、扣帶回、胼胝體等結(jié)構(gòu)，使海馬失去次要的傳人性神經(jīng)支配和傳出性神經(jīng)纖維)的海馬內(nèi)，移植藍(lán)斑神經(jīng)元(1ocus
ceru]eus，為去甲腎上腺素能神經(jīng)元，屬抑制性神經(jīng)元)和海馬神經(jīng)元。通過注射匹羅卡品誘發(fā)癲癇，移植藍(lán)斑神經(jīng)元組無癲癇發(fā)作，而移植海馬神經(jīng)元組癲癇發(fā)作持續(xù)存在并且發(fā)作間期棘波頻率明顯高于未移植的對照組癲癇鼠。B~saki研究提示，向癲癇鼠移植海馬神經(jīng)元有加重癲癇的可能，干細(xì)胞移植同樣也有加重癲癇的可能，因此必須嚴(yán)密觀察干細(xì)胞移植治療癲癇的療效和副作用。
3．移植細(xì)胞的整合：理想的細(xì)胞移植能夠整合到宿主神經(jīng)環(huán)路中，修復(fù)受損的神經(jīng)系統(tǒng)，應(yīng)該具有以下特征⋯ ：①移植細(xì)胞能夠存活，并且存活細(xì)胞的數(shù)量達(dá)到修復(fù)神經(jīng)環(huán)路的標(biāo)準(zhǔn)；② 移植細(xì)胞能夠從移植點遷徙到適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞層；③移植細(xì)胞能夠發(fā)育為移植區(qū)域特異性(target region—specific)神經(jīng)元；④移植細(xì)胞能夠發(fā)出傳出神經(jīng)纖維，與宿主神經(jīng)元建立傳出性突觸聯(lián)系(eferent connectivity)；⑤ 移植細(xì)胞能夠接受宿主神經(jīng)元發(fā)出的傳人性神經(jīng)纖維，與宿主神經(jīng)元建立傳入性突觸聯(lián)系(aferent connectivity)。今后干細(xì)胞移植治療癲癇的實驗，應(yīng)改在以上5個方面證明移植的干細(xì)胞是否整合到宿主神經(jīng)環(huán)路中。
4．癲癇微環(huán)境(epileptic microenvironment)：Gage等 研究表明，從成年海馬獲得的干細(xì)胞移植到成年大鼠嗅球附近時，可分化為表達(dá)酪氨酸羥化酶的神經(jīng)元，正常情況下只有嗅球能夠產(chǎn)生這種神經(jīng)元，海馬不產(chǎn)生這類神經(jīng)元。將相同的神經(jīng)干細(xì)胞移植到海馬后，干細(xì)胞可分化為典型的海馬錐體神經(jīng)元。移植的神經(jīng)干細(xì)胞在白質(zhì)大多發(fā)育為星形膠質(zhì)細(xì)胞，而在灰質(zhì)大多發(fā)育為神經(jīng)元，以上研究表明神經(jīng)干細(xì)胞所處的局部環(huán)境決定干細(xì)胞最終發(fā)育的結(jié)果。顳葉癲癇患者海馬內(nèi)不僅有神經(jīng)元的缺失，還存在大量的異常放電的“癲癇神經(jīng)元”_l 。癲癇灶外遠(yuǎn)隔部位神經(jīng)元的正常生理活動在擴(kuò)散中轉(zhuǎn)變成癇性活動，成為鏡影癲癇灶，這一現(xiàn)象被許多研究所報道。神經(jīng)元在“癲癇環(huán)境”下的可塑性成為目前研究的焦點，同樣神經(jīng)干細(xì)胞在癲癇微環(huán)境下也有轉(zhuǎn)變?yōu)?ldquo;癲癇神經(jīng)元”的可能。
神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)育具有區(qū)域特異性，在給干細(xì)胞移植治療癲癇帶來希望的同時，也帶來了挑戰(zhàn)。在癲癇患者的海馬內(nèi)移植的神經(jīng)干細(xì)胞是被誘導(dǎo)分化為丟失的神經(jīng)元并起到治療癲癇的作用，還是被誘導(dǎo)發(fā)育為異常放電的“癲癇神經(jīng)元”而加重癲癇發(fā)作 ?目前尚不能定論，這成為今后干細(xì)胞移植治療癲癇亟待解決的重要問題。
5．基因治療載體：Thompson 和Huber等的研究表明將谷氨酸脫羧酶(glutamic acid decarboxylase，GAD)、腺苷等基因片段導(dǎo)入到條件永生化細(xì)胞中，使其在移植部位進(jìn)行表達(dá)，可達(dá)到抑制癲癇發(fā)作的目的。條件永生化細(xì)胞有導(dǎo)致細(xì)胞癌變的可能。神經(jīng)干細(xì)胞作為基因治療載體具有其它載體所沒有的優(yōu)點：①可攜帶多個外源基因；②能整合于宿主組織，外源基因表達(dá)穩(wěn)定，維持時間長；③有遷移能力，能遠(yuǎn)距離遷移到病變部位；④ 有修復(fù)功能，能分化為成熟細(xì)胞修復(fù)病損組織；⑤ 自身干細(xì)胞移植，避免產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。
膠質(zhì)瘤、脊髓損傷等大量實驗已經(jīng)證明神經(jīng)干細(xì)胞是基因治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的理想載體 。利用基因工程技術(shù)，將GAD(GABA合成酶)、腺苷等治療基因?qū)肷窠?jīng)干細(xì)胞中，使其在移植部位進(jìn)行表達(dá)，進(jìn)而達(dá)到治療癲癇的目的是干細(xì)胞移植治療癲癇的一個重要發(fā)展方向 。
盡管干細(xì)胞移植治療顳葉癲癇有許多重大問題亟待解決，但隨著人們對顳葉癲癇發(fā)病機(jī)制和神經(jīng)干細(xì)胞認(rèn)識的不斷深入，干細(xì)胞移植治療顳葉癲癇有望成為一種嶄新的治療手段。
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